流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成。原則上，所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾，但在實際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別：當有機溶劑用色譜純級，水用石英亞沸水或其它超純水時，在能確保水和有機溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時，過濾并無更多實際意義。

當流動相中含有緩沖鹽時，則過濾是必要的，如前所述，當緩沖溶液放置一段時間，在使用前還應(yīng)重新過濾（含有緩沖鹽的流動相，長菌較快，建議現(xiàn)用現(xiàn)配）。

所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0.45μm(0.22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系，二者不可混用，以防止濾膜溶解而造成污染。

裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換，以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

當樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生永jiu性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機分子和強吸附性物質(zhì)，以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子。在進樣前應(yīng)盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達6000psi (磅/平方英寸)，但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命，避免的方法是：

1）柱壓過高時，盡可能采用較小的流速，以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。

2）當流速較大時，應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

3）使用手動進樣閥時，進樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當使用多柱聯(lián)用時，柱切換要避免在高壓下進行。

一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動相pH接近使用限度時，更應(yīng)降低使用溫度。

溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而使填料性質(zhì)改變，柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。

請您留意色譜柱說明書中的pH適用范圍，目前市面上大部分鍵合硅膠色譜柱表示的pH適用范圍是2-10，但在實際使用時應(yīng)避免ji端的pH條件。（當pH≤2時，建議使用月旭Ultimate^® LP系列色譜柱；當pH≥8時，建議使用月旭Xtimate^®系列色譜柱）。若您原有的色譜柱在偏堿性條件（pH≥8）下使用，可通過以下方法避免柱損害：

1）在泵和進樣閥之間加裝預(yù)柱（飽和柱）來飽和流動相。

2）降低使用溫度。

3）檢驗完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑"徹di清洗。

開始試驗前，應(yīng)了解柱中當前是何種溶劑。對于新色譜柱，如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。

保護柱的作用：過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)“拉圾"同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有不同孔徑的在線過濾器，但在線過濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染，因此，加裝保護柱是必要的，特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱bi不可少的措施。

保護柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒徑可較分析柱大。保護柱屬消耗品，經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析（50～100次）后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時，應(yīng)考慮更換保護柱。