正相色譜，出峰漂移，月旭帶你一探究竟！

更新時間：2022-05-07 點擊次數(shù)：2356

微信截圖_20220507154052.png

正相色譜是我們色譜分離中一種常用的分離模式。其分離原理是基于固定相的極性大于流動相，通過吸附作用，實現(xiàn)不同極性物質(zhì)之間的分離。正相色譜的優(yōu)勢是可用于分離反相色譜不保留或極性較強的化合物，且適用于絕不溶于水的物質(zhì)分離。

但是正相色譜也有困擾我們的難題。經(jīng)常會有老師在使用正相色譜柱時出現(xiàn)出峰保留時間漂移的情況，有些是使用的正相柱子，樣品出峰不斷地有前移的趨勢，有些是新買的正相柱子分離樣品保留時間和原有的舊柱子不一致等。

這到底是怎么回事呢，出現(xiàn)這類保留時間漂移的問題又該如何解決呢？今天小旭就帶大家一探究竟。

首先我們簡單介紹下正相色譜

? 定義：

固定相的極性大于流動相，基于固液吸附的原理，分離不同極性的樣品。

? 洗脫順序：

極性低的物質(zhì)先被洗脫出來。流動相的極性越強，洗脫能力也越強。

? 常見的正相色譜柱有：

硅膠柱，二醇基柱，氨基柱，氰基柱。

? 常用的流動相：

主要試劑：烷烴（戊烷，己烷，庚烷，辛烷），芳香烴（苯，甲苯，二甲苯），二氯甲烷，四氯化碳。

輔助試劑：甲基-t-丁基醚（MTBE），yi醚，四氫呋喃（THF），乙酸乙酯，乙腈，丙酮等。

微信截圖_20220507154148.png

正相色譜的優(yōu)勢是可用于分離反相色譜中不保留或極性較強的化合物，且適用于絕不溶于水的物質(zhì)分離，還可用于拆分異構(gòu)體。但正相色譜中，卻易出現(xiàn)保留時間漂移的情況。這究竟是什么原因呢？

原來正相色譜柱的固定相，特別是硅膠柱中未改性的裸硅膠，其中的硅醇基的極性特別強，其對流動相中甚至是實驗環(huán)境中的水分含量非常敏感。而由于正相色譜中固定相的水分含量常常是個影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù)，流動相中的水分含量通常影響保留時間和分離度。我們知道大部分溶劑都含有小部分的溶解水，比如正己烷在20℃下，其水分含量是0.0111%w/w。因此正相色譜中出現(xiàn)保留時間波動較大的問題，大多可歸因于固定相或流動相中水分含量的變化，而填料可能還是完好的。

那么正相色譜中，出現(xiàn)這種固定相或者流動相中的水分含量影響物質(zhì)保留時間的問題，該如何解決呢？

小旭給大家分享兩個解決方法：

1、去除固定相上的水分

用含2.5%二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個柱體積；

2、使用水分含量可控的流動相（比如：用水半飽和）

半飽和流動相配置方式：將無水的非極性流動相分成兩半；其中一半中加入一定量水，并混勻攪拌約一小時，靜置分層后，將多余的水相全部除去；將兩部分非極性流動相重新混合在一起就配成了“半飽和"流動相。

快來看一個案例吧~

● ● ● ● ● ● ●

? 售后案例背景

客戶新買的Topsil^®（拓譜）Silica硅膠柱，在做一個老項目時，目標化合物的保留時間出現(xiàn)了漂移。同時對比舊柱子上目標化合物的保留時間是在10min左右，而新柱子的目標化合物的保留時間卻出現(xiàn)在了20min左右。

色譜條件：

色譜柱：月旭Topsil^®Silica（4.6×250mm，5μm)。